Microinjecção para CRISPR: parâmetros essenciais na geração de modelos animais

Os animais transgénicos tornaram-se uma ferramenta fundamental na investigação biomédica, contribuindo de forma decisiva para o conhecimento das doenças e dos processos celulares básicos. Actualmente, a microinjecção pronuclear ou citoplasmática continua a ser um dos métodos mais utilizados para a edição do genoma e para a produção de modelos animais.Neste contexto, o sistema de micromanipulação e o microscópio invertido não são simples acessórios, mas elementos críticos que determinam a precisão da injecção, a integridade da amostra e a reprodutibilidade dos resultados.

Parâmetros essenciais na microinjecção para CRISPR

Na rotina de um laboratório que trabalha com CRISPR em modelos animais, vários factores técnicos condicionam o sucesso da microinjecção:

Controlo de movimento de alta precisão

Trabalhar com zigotos e pronúcleos implica deslocamentos extremamente finos nos três eixos. O sistema deve permitir uma aproximação progressiva e controlada do capilar, com resposta imediata ao comando e sem “saltos” intermédios. Isto reduz manobras correctivas e ajuda a manter uma entrada mais limpa e reprodutível em cada injecção.

Estabilidade mecânica e redução de vibrações

Qualquer vibração ou folga mecânica traduz-se em deslocamentos indesejados do capilar sobre a amostra. Um sistema com elevada estabilidade mecânica e funcionamento praticamente isento de vibrações facilita a manutenção da posição do capilar durante o contacto com o zigoto ou o pronúcleo — especialmente relevante ao trabalhar com embriões precoces sensíveis e com volumes de trabalho elevados.

Gestão do posicionamento e ergonomia do operador

Para além da precisão pontual, a rotina de trabalho exige:
• funções de retorno à posição (Home),
• memória de posições,
• e limites de percurso — especialmente no eixo Z — para evitar rupturas do capilar ou contactos excessivos com a amostra.
Combinado com um comando de design ergonómico, isto permite trabalhar durante mais tempo, com menos fadiga, mantendo a mesma qualidade de movimento ao longo de toda a sessão.

Integração com sistemas de microinjecção

O micromanipulador não funciona isoladamente: precisa de se coordenar com microinjectores electrónicos e, nalguns casos, com sistemas piezoeléctricos. A possibilidade de ligação directa a microinjectores como os FemtoJet® 4i/4x ou a sistemas como o PiezoXpert® simplifica a configuração, reduz a cablagem desnecessária e ajuda a normalizar protocolos entre utilizadores.

Adaptação a aplicações exigentes de edição genética

Não é o mesmo injectar um simples marcador do que realizar injecções pronucleares ou citoplasmáticas em projectos com CRISPR/Cas ou TALEN. Um sistema concebido para estas aplicações deve permitir:

1. trabalhar com ovócitos e embriões precoces,
2. manusear diferentes tipos de amostras (células em suspensão, micropartículas, etc.),
3. e oferecer perfis de utilização adaptados à técnica (transferência celular, injecção de DNA/RNPs, etc.).

TransferMan® 4r em aplicações de microinjecção para CRISPR

A microinjecção de componentes CRISPR em zigotos e embriões exige uma combinação de precisão extrema, estabilidade mecânica e fluidez de trabalho. O micromanipulador electrónico TransferMan® 4r responde a estes requisitos em contextos de engenharia genética, transgénese e produção de modelos animais:

• Incorpora o joystick DualSpeed™, concebido para um controlo de movimento preciso, intuitivo e dinâmico nos três eixos, com transmissão muito directa dos deslocamentos e uma sensação de resposta praticamente em “tempo real”.
• Proporciona uma estabilidade mecânica muito elevada, orientada para um funcionamento praticamente livre de vibrações — aspecto crucial para manter o capilar estável durante a microinjecção de zigotos e embriões.
• Inclui funções inteligentes de apoio ao operador, como a função Home automatizada melhorada, memória de posições e o limite programável do eixo Z para prevenir a ruptura do capilar, contribuindo para uma gestão do posicionamento mais segura e eficiente.
• Está preparado para integrar um ecossistema completo de microinjecção, graças à ligação ao PiezoXpert®, aos microinjectores FemtoJet® 4i/4x e a diversos adaptadores para os principais microscópios invertidos. Isto permite configurar sistemas de trabalho orientados para a micromanipulação de ovócitos e embriões precoces, injecção pronuclear e citoplasmática e aplicações de edição genética com CRISPR/Cas.

Desta forma, o TransferMan® 4r não se apresenta como um equipamento isolado, mas como uma solução que materializa na prática os critérios técnicos que fazem a diferença na microinjecção para CRISPR.

Conclusões

Para laboratórios que trabalham intensivamente com CRISPR em modelos animais, a combinação adequada de sistema de micromanipulação, microinjectores e microscópio invertido é essencial para garantir precisão, reprodutibilidade e segurança em cada microinjecção.
Se estiveres a considerar rever ou optimizar a tua configuração de microinjecção para CRISPR, a nossa equipa pode ajudar a analisar o fluxo de trabalho actual e a avaliar quais as opções de micromanipulação e injecção que melhor se adaptam às tuas necessidades experimentais.